系统地了解猪场的基本情况、生产状况、临床状况、免疫背景、猪伪狂犬病的感染和免疫状态是制定高效防控和净化方案的前提和基础。
01 猪场伪狂犬病摸底调查的内容
开展全面的猪场摸底调查，有助于更科学地制定伪狂犬病的控制和净化措施。
1.1 猪场基本情况收集
猪场基本情况收集：包括猪场布局、周边养殖情况、生产模式、硬件设施、存栏量、生产流程、管理水平、兽医团队和生物安全防控措施等基本信息。
1.2 猪场生产数据
包括配种分娩率、流产率；断奶至发情间隔天数；产仔数、健仔数、死胎、木乃伊胎、弱仔数；以及产房、保育、育肥阶段的成活率等。
1.3 猪群当前的生产情况和临床表现
猪群是否稳定？中大猪是否有呼吸道疾病？保育猪是否有呼吸道和神经症状？产房小猪是否有神经症状，顽固性腹泻？母猪是否有流产等异常表现？近期是否有引种活动？
1.4 免疫背景
主要疫病的免疫程序（如猪瘟、伪狂犬病、圆环病毒、蓝耳病等）；疫苗厂家、毒株、免疫时间、免疫剂量等。
1.5 实验室检测数据
收集猪场主要疫病的检测数据，特别是猪伪狂犬病病原和抗体监测结果。尽量整理后备种猪入群监测结果，精液病原检测结果，母猪、仔猪gB/gE抗体监测结果等。如果猪场近期没有相关实验室检测结果，可以根据猪场生产情况和猪群临床情况，制定检测方案，并采集相应样品送实验室检测。
02 病原学检测及结果应用
在猪群出现异常情况，疑似发生猪伪狂犬病时，首要任务是采集病原学样品进行实验室诊断。2.1病原学样品采集
2.1.1 异常猪样品
伪狂犬病毒感染猪只从鼻分泌物、唾液、乳汁和尿中排出病毒。采集死亡和发病猪的病料（脑、扁桃体、脾脏、肺脏、淋巴结）、流产胎儿组织、活猪的扁桃体、鼻拭子等样品。
2.1.2 精液样品
每月定期采集种猪的精液样品进行伪狂犬病原检测。
2.1.3 样品包装和送检
采集的样品需分别装入防渗漏的容器中，并及时冷藏送检（建议使用足量的冰块保持低温）。如果无法立即送检，样品应冷冻保存。猪场在送检时还应认真填写采样单，并与样品一同寄送。这样做可以避免样品混淆，并确保实验室能够及时、准确地进行检测。
2.2 检测方法
猪伪狂犬病原检测可采用动物接种、细胞分离鉴定、分子生物学检测等方法。PCR（聚合酶链反应）因其快速、敏感和特异性强等优点而被广泛应用。PCR技术能够同时处理大量样品，并且支持活体检测，非常适合临床诊断。由于伪狂犬病毒核酸DNA的高GC含量，进行PCR扩增时需要选择适合高GC含量的扩增mix或buffer。普通PCR方法可以参照《GB/T 18641-2018伪狂犬病诊断方法》执行，而双重荧光PCR则可按照《GB/T 35911-2018伪狂犬病毒荧光PCR检测方法》操作。当检测到猪伪狂犬野毒阳性时，对于规模猪场或养殖集团，建议进行遗传变异分析，以便更精准地指导伪狂犬疫苗的选择。值得注意的是，自2012年以来检测到的野毒大多数为变异毒株。
2.3 检测结果的应用
一旦猪场检测发现伪狂犬野毒阳性（gE基因阳性，Ct值越低，表明病毒含量越高），对于表现出明显临床症状的猪只，应采取淘汰或隔离措施。同时，猪群全群需要紧急免疫接种猪伪狂犬活疫苗1-2头份。如果精液病原检测呈阳性，相关精液应立即弃用，且公猪建议淘汰。这样的措施有助于控制病情的扩散，保障猪群健康。
03 血清学监测及结果运用
猪伪狂犬病的病毒血症期较短，中大猪感染后可能不表现明显的临床症状。当前，猪场广泛使用的猪伪狂犬疫苗为gE基因缺失疫苗。因此，通过血清抗体（gB/gE抗体）检测，可以有效掌握猪群的感染情况和免疫状态。
3.1 血清样品采集方案
在调查群体中的流行病情况时，全群采样往往不可行。因此，需采用抽样调查的方式，通过样本的调查来推断总体情况。抽样调查应兼顾准确性、效益性和实际可操作性，确定合适的样本容量，既能满足统计模型的需求，又能降低数据收集难度和成本。在生产实践中，常用的抽样方案如下：
3.1.1 猪群证明无疫或发现疫病的抽样
根据国家猪伪狂犬病净化标准，对于生产公猪存栏量在50头以下的情况，实行100%采样；对于存栏量超过50头的，按照证明无疫的公式计算(CL=95%，P=3%)进行随机抽样。同样，生产母猪和后备种猪也按照证明无疫的公式(CL=95%，P=3%)进行随机抽样，以确保不同猪群的代表性。
3.1.2 分阶段连续性监测
为了更准确地掌握猪群的健康状况，可以将猪群按照生产流程分为多个小群体。例如，将种猪分为种公猪、后备母猪、怀孕中期、怀孕后期和哺乳期母猪群；将仔猪/肉猪群按年龄阶段进行分群，如分为4周龄、8周龄、12周龄、16周龄、20周龄、24周龄等小群体，或按照周龄进行分群。每个阶段或每个小群体中，采集10-15份样品进行监测。对于种公猪，应实施全部采样监测；而在基础母猪采样时，应兼顾不同胎次的母猪。这种采样方案能够基本掌握各阶段猪群的免疫状态和健康状况。
3.1.3 后备引种、入群监测
对于后备种猪，在引种前应按照10%-20%的比例进行采样监测，如有必要，可实行全部采样监测。在后备种猪入群前，应进行全面采样，对其进行主要疫病的抗原抗体监测，以确保新引入的种猪不会带来新的疾病风险。
3.1.4 免疫效果监测
疫苗免疫后3-4周随机采集30份左右的样品进行抗体监测。
3.2 检测方法
血清学检测主要包括乳胶凝聚试验、血清中和试验、ELISA（酶联免疫吸附试验）、免疫金标和直接免疫荧光法等。
3.2.1 血清中和试验
PRV血清中和试验是OIE的法定检测方法，其特异性、敏感性较好。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体称为中和抗体。PRV的一系列糖蛋白、非糖蛋白和结构蛋白的抗体都可以抑制病毒在体内或体外的复制，但是它们起到的作用程度不一。研究表明，针对gC和gD的补体依赖性病毒中和抗体是最有效的。gC抗体具有抑制病毒在靶细胞上黏附的作用，而gD抗体则能抑制病毒穿入细胞，从而阻断感染的第一阶段。在恢复期，抑制病毒复制的主要抗体是针对gC的抗体，而gB抗体也可以促进猪的免疫保护作用。中和抗体的水平不是由某个单一抗体决定的，而是由多个抗体共同作用的结果。衡量中和抗体水平的一个方法是通过中和试验，该试验可以测出血清中和病毒的中和效价，效价越高说明中和病毒的能力越强。然而，由于中和试验技术条件要求较高、时间较长，因此主要用于实验室评价。此外，同一份样品对不同伪狂犬毒株的中和效价可能存在差异，因此在检测中和抗体效价时，应针对主要流行毒株进行测定。
3.2.2 ELISA抗体检测
ELISA具有特异性强、敏感度高、操作简便、重复性好等特点，是最简便的方法之一，得到了许多国家的认可。目前已有成熟的商品化伪狂犬gB-ELISA和gE-ELISA抗体检测试剂盒。gB-ELISA试剂盒包括间接ELISA和竞争ELISA两种形式，而gE-ELISA试剂盒多采用竞争ELISA。当前，猪场使用的疫苗都是gE基因缺失疫苗，免疫后不会产生gE抗体，但会产生gB抗体。野毒感染后可产生gB抗体和gE抗体。伪狂犬的母源抗体（gB/gE抗体）持续时间较长，通常gB抗体可持续8-10周以上，而gE母源抗体可持续至100日龄左右。在分析伪狂犬gB/gE抗体时，应注意以下几点：
（1）gB抗体阳性可能是免疫抗体、母源抗体或感染后产生的抗体。
（2）gB抗体阳性并不意味着具有保护力。例如，IDEXX的gB-ELISA中，当S/N≤0.6时判为抗体阳性，但通常要S/N≤0.2（经验值，不同的试剂盒有差异）才具有较好的保护力。
（3）gE抗体阳性可能是感染抗体或母源抗体。通常来自母源抗体的gE抗体持续时间不超过120日龄，120日龄以上的gE抗体阳性应视为感染抗体。（4）gB和gE抗体是否同步可以作为猪群伪狂犬活跃度的一个指标。gE抗体阳性种猪进行疫苗免疫后，如果未被野毒再次感染，则表现为gE抗体滴度逐渐下降，而gB抗体免疫后呈上升状态，呈现gE抗体与gB抗体不同步的现象。免疫后的种猪如果近期被野毒再次感染，则表现为gB和gE抗体滴度同步升高，且由于野毒株的免疫原性更好，其gE抗体滴度更高。猪伪狂犬gB抗体间接ELISA试剂盒的敏感性比竞争ELISA低，但gB抗体滴度与中和抗体具有一定的平行关系。临床检测中常通过检测gB抗体来推测中和抗体滴度。百测/普泰的伪狂犬gB抗体ELISA试剂盒是间接ELISA，其S/P值与血清中和抗体存在较好的线性关系。
不同厂家生产的伪狂犬gB-ELISA和gE-ELISA检测试剂盒，在判断标准和结果解读上存在一定的差异。因此，在分析结果时，必须了解不同试剂盒的特性及其解读方法，特别是检测结果与临床表现或保护效果之间的关联。这样才能确保准确评估猪群的免疫状况和感染风险，从而采取恰当的防控措施。
3.3 血清样品采集方案
在调查群体中的流行病情况时，全群采样往往不可行。因此，需采用抽样调查的方式，通过样本的调查来推断总体情况。抽样调查应兼顾准确性、效益性和实际可操作性，确定合适的样本容量，既能满足统计模型的需求，又能降低数据收集难度和成本。在生产实践中，常用的抽样方案如下：
3.3.1 评价gE抗体阳性种猪伪狂犬感染/免疫状态
通过分析不同阶段母猪群的gE抗体阳性率，可以评估其感染状态。利用gB抗体阳性率、均值和离散度来评价免疫状态。此外，通过分析gB和gE抗体是否同步变化，可以评估伪狂犬病的活跃度（详见表3）。通过比较不同胎次母猪的gE抗体情况，可以评估后备猪入群后伪狂犬病的感染情况，以及种猪群之间水平传播的情况。
3.3.2 评价仔猪gB/gE抗体消长规律
收集不同周龄的仔猪/肉猪血清样品，确定gE抗体转阳和gB抗体消失的时间点，从而评估猪群中伪狂犬病发生感染的阶段（表3）。在制定免疫程序时，需要考虑病原的潜伏期、疫苗起效时间以及疫苗免疫保护期等因素。伪狂犬病的潜伏期为2周，活疫苗的起效期约为1周。对于阳性不稳定的猪场，可以根据gE抗体转阳和gB抗体消失的时间点，结合临床猪群健康管理水平来制定免疫程序。建议在gE抗体转阳点前3～4周进行第二次肌注免疫，并再往前推4～5周进行第一次肌注免疫。
3.3.3 伪狂犬gE阳性稳定场/阴性场首免日龄的确定
有试验表明，伪狂犬中和抗体半衰期为14天。针对伪狂犬稳定场或阴性场免疫程序的评估，可检测4周、6周、8周仔猪血清中和抗体或gB抗体（间接ELISA与中和抗体的对应关系，咨询相应的检测试剂供应商），首免疫日龄为中和抗体的2log2倍。如:28日龄的中和抗体为5log2，伪狂犬中和抗体半衰期为14天，则血清抗体将至2log2时，则首免日龄=28+（log25-2log22）x 14天=70日龄。
备注：由于不同试剂盒的判断经验值可能存在差异，建议结合试剂供应商的建议进行分析和评价。总之，在综合考虑准确性、经济性和实际操作性的基础上，应多维度收集猪场伪狂犬的基本情况，并有计划地开展猪伪狂犬病抗原和抗体监测。通过综合评估猪场伪狂犬病毒的感染状态和免疫状况，为猪场伪狂犬病的控制和净化工作奠定坚实的基础。
